Procedure en interpretatie

De Pathoproof is een methode die gebaseerd is op PCR-technologie waarbij men in een melkmonster op zoek gaat naar het DNA van een bacterie. Omdat voor deze methode geen kweek vereist is, kunnen we sneller tot een resultaat komen. Een bijkomend voordeel is de grotere gevoeligheid van de methode waardoor er minder vals-negatieve resultaten zijn in vergelijking met de standaard cultuur. De techniek wordt bovendien ook niet beïnvloed door eventuele antibiotica aanwezig in het monster, of aanwezigheid van bewaarmiddel (cfr. MPR-monsters). 

Procedure

De initiële hoeveelheid DNA die in het monster zit, is onvoldoende om gedetecteerd te worden. Daarom wordt het aanwezige bacterieel DNA uit het monster gehaald waarna in een aantal tussenstappen de reagentia worden toegevoegd die nodig zijn om het DNA te vermeerderen. Vervolgens worden de voorbereide monsters in het Pathoproof PCR-toestel geplaatst. Tijdens een vast aantal cycli van opwarmen en afkoelen, wordt het DNA gedurende anderhalf uur vermeerderd. Hierbij worden fluorescerende signalen doorgestuurd. Het tijdstip (uitgedrukt in het aantal doorlopen cycli, weergegeven als de Ct-waarde) waarbij het signaal van een bepaalde bacterie een vooraf vastgestelde grenswaarde overschrijdt, wordt opgemeten. Hoe sneller dit gebeurt binnen het volledige vermeerderingsproces, hoe meer DNA er aanwezig is. Hoe kleiner dus de Ct-waarde voor een bepaalde bacterie (met een bereik tussen 12 en 37), hoe sterker het melkmonster positief is voor deze bacterie. Wanneer de test pas positief wordt na 37 cycli, beschouwen we het monster negatief voor deze bacterie.